การหาปริมาณฮอร์โมนพืชกลุ่มบราสสิโนสเตียรอยด์ในน้ำหมักชีวภาพ

Abstract

วิธีวิเคราะห์ทางสเปกโทรฟลูออโรเมทรีได้ถูกพัฒนาขึ้นสำหับการหาปริมาณฮอร์โมนพืช กลุ่มบราสสิโนสเตียรอยด์ โดยเทียเคียงกับบราสสิโนไลด์ การวิเคราะห์อาศัยการเกิดปฏิกิริยาระหว่างบราสสิโนไลด์ และเมตา – แดนซิลอะมิโนเฟนิลบอโรนิค แอซิด สภาวะที่เหมาะสมในการเกิดปฏิกิริยา มีดังนี้ ใช้ เมตา – แคนซิลอะมิโนเฟนิลบอโรนิค แอซิด 90 ไมโครโมลาร์ ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิห้อง (ประมาณ 30 องศาเซลเซียส) เป็นเวลา 20 นาที ในสารละลานฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 5 มิลลิโมลาร์ พีเอช 7 ความยาวคลื่นที่ใช้ในการกระตุ้นและการคายแสง สำหรับการตรวจวัดสารผลิตภัณฑ์ที่ได้คือ 380 และ 505 นาโนเมตร ตามลำดับ ภายใต้สภาวะที่เหมาะสม พบว่าวิธีวิเคราะห์นี้มีช่วงความเป็นเส้นตรงอยู่ในช่วง 1-50 ไมโครโมลาร์ ค่าขีดจำกัดความตรวจวัด (3sd/m) คือ 38 นาโนโมลาร์ และขีดจำกัดในการหาปริมาณ (10sd/m) คือ 127 นาโนโมลาร์ วิธีการเติมสารละลายมาตรฐานถูกนำมาประยุกต์ใช้สำหรับการหาปริมาณฮอร์โมนพืชกลุ่มบราสสิโนสเตียรอยด์ในตัวอย่างน้ำหมักชีวภาพ โดยไม่ต้องมีการเตรียมตัวอย่างที่ยุ่งยาก A spectrofluorometric method was developed for quantitative determination of brassinosteroids plant hormones, which equivalent to brassinolde. The determination based on the reaction between brassinolde and m-dansylaminophenylboronic acid. The 90 µM of m-dansylaminophenylboronic acid solution was chosen as the optimal concentration of the reagent. The temperature of the reaction was 30°C (room temperature) for 20 min duration time in 5 mM phosphate buffer solution, ph 7. The excitation and emission wavelength were 380 nm and 505 nm, respectively. Under optimal condition, linearity was found in a range of 1-50 µM. Limit of detection (3sd/m) of 38 nM and limit of quantitation (10sd/m) of 127 nM were obtained by this method. Standard addition was used for the brassinosteroids determination in bio-extract samples, without any sample preparation.