การผลิตปริมาณสูงและการตรึงเอนไซม์อะลิฟาติกอะมิเดส สำหรับประยุกต์ใช้ในกระบวนการสลายอะคริลาไมด์และอุตสาหกรรมการผลิตกรดอะคริลิก.

Abstract

การใช้สารพิษอะคริไมด์ที่มีแนวโน้มเป็นสารก่อมะเร็งในคนอย่างกว้างขวางส่งผลให้พบการปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อม แต่ในความเป็นพิษของอะคริลาไมด์ยังมีจุลินทรีย์บางชนิดสามารถใช้พลังงานจากอะคริลาไมด์ในการเจริญได้ โดยเกิดการสลายอะคริลาไมด์เป็นแอมโมเนียและกรดอะคริลิก จากการทำงานของเอนไซม์อะมิเดส (EC 3.5.1.4) ด้วยปฏิกิริยาดีอะมิเนชั่น ในการศึกษาก่อนหน้ามีการใช้เทคนิคพีซีอาร์หาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนที่กำหนดการสรางเอนไซม์อะมิเดสใน Enterobacter aerogenes ซึ่งเป็นแบคทีเรียสลายอะคริลาไมด์ชนิดใหม่สำหรับในโครงการวิจัยนี้ได้นำเทคนิคพีซีอาร์มาใช้ในการเพิ่มปริมาณชิ้นยีนที่กำหนดการสร้างเอนไซม์อะมิเดสจาก E.aerogenes และโคลนเข้าสู่ดีเอ็นเอพาหะเอื้อการแสดงออก pColdl ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะมิเดสที่โคลนได้มีชนาด 726 คู่เบส ที่สามารถคาดเดาเป็นกรดอะมิโนจำนวน 242 ตัว ริคอมบิแนนท์อะมิเดสที่โคลนได้มีการแสดงออกขนาด 28 กิโลดาลตันในเซลล์ให้อาศัย Escherichia coli DH5 แต่มีการแสดงออกที่มากเกินไปจนจับกันเป็นก้อนตกตะกอนภายในเซลล์ในรูปของอินคลูชั่นบอดี้ โดยความเข้มข้นของ IPTG การเติมกลูโคส แลคโตสและกลีเซอรอล และการสแดงออกที่อุณหภูมิต่ำไม่สามารถลดการแสดงออกของริคอมบิแนนท์อะมิเดสในรูปของอินคลูชั่นบอดี้ในเซลล์ได้ทั้งหมด