การประเมินความปลอดภัยของโปรตีน Vip3Aa

Abstract

แบคทีเรีย Bacillus thuringiensis ผลิตโปรตีนสารพิษ Vip3Aa ซึ่งเป็นโปรตีนที่มีความสามารถในการฆ่าหนอนศัตรูพืช ในอันดับ Lepidoptera ที่มีความสำคัญต่อพืชเศรษฐกิจไทย ได้แก่ กลุ่มหนอนกระทู้และหนอนกอ ในการพัฒนาต่อยอดเป็นชีวภัณฑ์จำเป็นต้องมีข้อมูลด้านพิษวิทยาของโปรตีนสารพิษ ซึ่งในปัจจุบันยังไม่มีข้อมูลนี้เพียงพอสำหรับโปรตีน Vip3Aa งานวิจัยนี้ศึกษาความเป็นพิษของ Vip3Aa และศึกษาสภาพความคงทนต่อสภาวะต่าง ๆ โดยเริ่มจากการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน Vip3Aa ใน E. coli พบว่าโปรตีนสามารถแสดงออกมาในรูปแบบละลายน้ำได้ที่ขนาด 90 kDa จากนั้นนำไปทดสอบความคงทนต่ออุณหภูมิ พบว่า Vip3Aa จะสลายไปเมื่ออุณหภูมิสูงขึ้นมากกว่า 75°C ในเวลา 30 นาที และไม่ทนต่อแสง UV เมื่อเวลาผ่านไป 2 วัน ผลการศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์มนุษย์ปกติ ชนิดไฟโบบลาส เมื่อวิเคราะห์ความมีชีวิตของเซลล์ด้วยเทคนิค MTT พบว่าเซลล์ยังมีการเจริญเติบโตปกติเมื่อเทียบกับเซลล์ควบคุมที่ไม่ได้รับโปรตีนสารพิษ ที่ความเข้มข้นสูงสุด 2 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร จากผลการทดลองแสดงให้เห็นในเบื้องต้นว่า โปรตีน Vip3A ปลอดภัยต่อเซลล์มนุษย์และไม่ตกค้างในสิ่งแวดล้อมหากนำไปใช้งานจริง