กรุณาใช้ตัวระบุนี้เพื่ออ้างอิงหรือเชื่อมต่อรายการนี้:
https://buuir.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/376ระเบียนเมทาดาทาแบบเต็ม
| ฟิลด์ DC | ค่า | ภาษา |
|---|---|---|
| dc.contributor.author | จิตติมา เจริญพานิช | |
| dc.contributor.other | มหาวิทยาลัยบูรพา. คณะวิทยาศาสตร์ | |
| dc.date.accessioned | 2019-03-25T08:47:31Z | |
| dc.date.available | 2019-03-25T08:47:31Z | |
| dc.date.issued | 2554 | |
| dc.identifier.uri | http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/376 | |
| dc.description.abstract | การใช้สารพิษอะคริลาไมด์ที่มีแนวโน้มเป็นสารก่อมะเร็งในคนอย่างกว้างขวางส่งผลให้พบการปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อม ในความเป็นพิษของอะคริลาไมด์ยังมีจุลินทรีย์บางชนิดสามารถใช้พลังงานจากอะคริลาไมด์ในการเจริญได้ โดยเกิดการสลายอะคริลาไมด์เป็นแอมโมเนียและกรดอะคริลิก จากการทำงานของเอนไซม์อะมิเดสหรืออะมิโดไฮโดรเลส (CE 3.5.1.4) ด้วยปฏิกิริยาดีอะมิเนชั่น ในรายงานการวิจัยนี้ได้มุ่งเป้าไปที่การใช้เทคนิคพีซีอาร์หาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนอะลิฟาติกอะมิดิสใน Enterobacter aerogenes ซึ่งเป็นแบคทีเรียสลายอะคริลาไมด์ชนิดใหม่ที่คัดแยกได้จากน้ำทิ้งชุมชนใกล้บริเวฯนิคมอุตสาหกรรมในจังหวัดชลบุรีและมีศักยภาพในการสลายอะคริลาไมด์สูงที่สุดในจำนวนแบคทีเรียสลายอะคริลาไมด์ที่มีในห้องปฏิบัติการชีวเคมีสิ่งแวดล้อมและจุลินทรีย์บำบัด ภาควิชาชีวเคมี คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา การทดลองเริ่มต้นจากการใช้ตีเจนเนเรซีไพรเมอร์ที่ออกแบบมาจากลำดับกรดอะมิโนบริเวณอนุรักษ์ของยีนอะมิโดไฮโดรเลสในแบคทีเรียสกุล Enterobacter spp. เพิ่มปริมาณและโคลนยีนอะมิเดสช่วงปลายอะมิโนและปลายคาร์บอกซี ที่ประกอบด้วยนิวคลีโอไทดืจำนวน 297 และ 354 คู่เบสตามลำดับ เข้าสู่พลาสมิด pUC118 และทรานส์ฟอร์มเข้า Escherichia coli DH5a นำลำดับนิวคลีโอไทด์ที่หาได้มาออกแบบไพรเมอร์ชุดใหม่เพิ่มเพิ่มปริมาณชิ้นยีนอะลิฟาติกอะมิเดสในช่วงกลางและช่วงปลาย 3' ด้วยเทคนิคพีซีอาร์ย้อนกลับแบบจำเพาะ โคลนผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ที่ได้เข้าสู่พลาสมิด pTG19-T และหาลำดับนิวคลีโอไทด์ทั้งหมด ผลการทดลองที่ได้พบลำดับนิวคลีโอไทด์ของยียนอะลิฟาติกอะมิเดสของ E. aerogenes ขนาด 726 คู่เบส ที่สามารถคาดเดาเป็นกรดอะมิโนจำนวน 242 ตัว และมีความคล้ายคลึงมากกว่าร้อยละ 80 กับยีนของเอนไซม์ในกลุ่มไนไตร์เลส/ไซยาไนด์ ไฮโดรเลสและอะมิเดสของ enterobacteriaceae ที่มีในฐานข้อมูลโลก และลำดับกรดอะมิโนที่คาดเดาจากลำดับนิวคลีโอไทด์ที่หาได้พบความเหมือนมากว่าร้อยละ 88 กับเอนไซม์อะมิเดส จาก E. aerogenes พบว่าเอนไซม์มีโครงสร้างเป็นโปรตีนก้อนกลมแบบ a/b ที่ประกอบด้วย แอลฟา-ฮีลิกซ์ จำนวน 6 เกลียวและบีตา-ชีท 6 สายที่จับกันเป็นแผ่นเรียบ 2แผ่น ที่มีความคล้ายคลึงร้อยละ 45 กับโครงสร้างสามมิติของเอนไซม์ไนตราเลสจาก Xanthomonas camprestis ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่ตัดพันธะระหว่างอะตอมคาร์บอนและไนโตรเจนที่ไม่ใช่พันธะเพปไทด์ ผลการทดลองที่ได้แสดงถึงความสำเร็จในการใช้เทคนิคพีซีอาร์เพิ่มปริมาณชิ้นยีนอะเมิเดสของ E. aerogenes ซึ่งจะเป็นข้อมูลพื้นฐานในการโคลนและแสดงออกยีนดังกล่าวในระบบโปรคาริโอตต่อไป | th_TH |
| dc.description.sponsorship | ได้รับทุนอุดหนุนการวิจัยจากงบประมาณแผ่นดิน มหาวิทยาลัยบูรพา ประจำปี 2554. | en |
| dc.language.iso | th | th_TH |
| dc.publisher | คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา | th_TH |
| dc.subject | กรดอะคริลิก - - การผลิต | th_TH |
| dc.subject | สาขาวิทยาศาสตร์เคมีและเภสัช | th_TH |
| dc.subject | สารประกอบอะลิฟาติก | th_TH |
| dc.subject | อะคริลาไมด์ | th_TH |
| dc.title | การผลิตปริมาณสูงและการตรึงเอนไซม์อะลิฟาติกอะมิเดสสำหรับประยุกต์ใช้ในกระบวนการสลายอะคริลาไมด์และอุตสาหกรรมการผลิตกรดอะคริลิก | th_TH |
| dc.title.alternative | High-level production and immobilization of an aliphatic amidase for application in acrylamide degradation and industrial production of acrylic acid. | en |
| dc.type | Research | |
| dc.year | 2554 | |
| dc.description.abstractalternative | A widespread use and indiscriminate discharge of acrylamide, a neurotoxicant and probably human carcinogen has led to their presence in environment.In spite of its general toxicity, some microoraanisme can derive energy from acrylamide for growth. In its catabolism, acrylamide is deaminated to ammonia and acrylix aacid, a process catalyzed by amidase or amidohydrolase (EC 3.5.1.4). In this study,an attempt has been tried to identify an aliphatic amidase gene from Enterobacter aerogenes, a noel acrylamide-degrading bacterium isolated from domestic wastewate in Chonburi. The amidase gene from this bacterium was initially identified by PCR using degenerate primers designed from conserved amino acid sequences of amidohydrolasc genes of Enterobacter spp. Amino- and carboxy-terminal fragment of the gene consisted of 297 and 354 nucleotides,respectively were successfully amplified and cloned into pUC118. The ligation products were transformed into Escherichia coli DH5a and nucleotide sequencing of the gene was carried out. The, new sets of primer were designed according to the obtained sequences. The internal fragment and the unknown 3'- franking region of the gene were amplified with nested-inverse PCR method. After that, the obtained PCR products were cloned into pTG19.T The open reading frame of the gene consisted of 726 nucleotides (242 deduced amino acids) were obtained. BLAST analysis showed more than 80% similarity to that of several amidase and nitrilase/cyanide hydrolase genes from Enterobacteriaceae submitted to Genbank. The deduced amino acid sequences revealed more than 88% homology th other amidases in the same family. The three-dimensional structure of E. aerogenes amidase was predicted based on homology modeling. The enzyme was a a/b globular protein comprising mainly six a helices and tow six-stranded B sheets and showed 45% identity with nitrilase, a nonpeptide C-N hydrolyzing enzyme, from Xanthomonas camprestis. These results highlight the potential of PCR technique to idntify the amidase gene from E. aerogenes. The obtained gene has been expected to use for further cloning and high-level expression fo amidase in prokaryotic system. | en |
| ปรากฏในกลุ่มข้อมูล: | รายงานการวิจัย (Research Reports) | |
แฟ้มในรายการข้อมูลนี้:
ไม่มีแฟ้มใดที่สัมพันธ์กับรายการข้อมูลนี้
รายการทั้งหมดในระบบคิดีได้รับการคุ้มครองลิขสิทธิ์ มีการสงวนสิทธิ์เว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอื่น