โครงการการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนอินซูลินไลท์โกรทแฟคเตอร์วันของปลาการ์ตูนส้มขาว (Amphiprion ocellaris)

Abstract

การผลิตรีคอมบิแนนท โปรตีน (recombinant protein) ของอินซูลินไลท โกรทแฟคเตอร วัน (Insulin-like growth factor-I; IGF-I) ซึ่งเป็นฮอร์โมนประเภทเปปไทด ที่ส่วนใหญ่ผลิตออกมาจากตับเมื่อถูกกระตุ้นด้วยโกรทฮอร์โมน โดยทำการโคลนยีน IGF-I จาก complementary DNA (cDNA) ของปลาการ์ตูนส้มขาว (Amphiprion ocellaris) ที่สามารถแปรรหัสได้เป็นโปรตีนสมบูรณ์ โดยใช้ pETSUMO เป็นดีเอ็นเอพาหะ รีคอมบิแนนท โปรตีน IGF-I (rIGF-I) ที่ผลิตได้อยู่ในสภาพละลายง่ายและแสดงออกในเซลล์ แบคทีเรีย Escherichia coli BL21 เมื่อเจริญเซลล์ ตั้งต้น 10 มิลลิลิตร เหนี่ยวนำด้วย isopropyl-β-thiogalactoside ความเข้มข้น 0.1 mM สามารถผลิต rIGF-I ได้ประมาณ 0.5 มิลลิกรัม เมื่อนำ rIGF-I ไปทำการทดสอบคุณสมบัติทางชีวภาพโดยผสมกับอาหารในระดับ 1, 0.1 และ 0.01 μg/g bwt/day ให้ปลากินติดต่อกัน 4 สัปดาห์ วัดอัตราการเจริญเติบโตสัมพัทธ์ (relative growth rate; RGR) การเจริญเติบโตจำเพาะ (specific growth rate; SGR) อัตราการเปลี่ยนอาหารเป็นเนื้อ (feed conversion rate, FCR) และประสิทธิภาพการใช้อาหาร (feed efficiency, FE) และระดับการแสดงออกของยีน insulin-like growth factor-I (IGF-I) และ vitellogenin (VTG) ด้วยวิธี quantitative SYBR® real-time PCR ผลการทดสอบพบว่า rIGF-I มีแนวโน้มเพิ่มอัตราการเจริญเติบเติบโตของปลาการ์ตูนส้มขาว และ rIGF-I ที่ระดับความเข้มข้น 1 μg/g bwt/day มีอัตราการเปลี่ยนอาหารเป็นเนื้อและมีประสิทธิภาพการใช้อาหารมากที่สุด แต่ระดับการแสดงออกของยีน IGF-I และ VTG ต่ำสุด