วิธี duplex RT-PCR-Enzyme-Linked Immunoassay เพื่อตรวจสอบ การปนเปื้อนของไวรัสตับอักเสบชนิดเอและโรตาไวรัสพร้อมกันในหอยนางรมสด

Abstract

การตรวจหาการปนเปื้อนของไวรัสในอาหารเป็นประจำในอาหารต้องอาศัยวิธีที่มีประสิทธิภาพและความเร็วในการตรวจสอบ การศึกษานี้ได้นำวิธี duplex RT-PCR มาใช้ในการตรวจสอบการปนเปื้อนของไวรัสตับอักเสบชนิดเอและโรตาไวรัสพร้อมกันในหอยนางรม โดยมีการออกแบบ primer จากบริเวณที่มี การอนุรักษ์ไว้ของไวรัสทั้งสองชนิด (บริเวณ VP4 ของไวรัสตับอักเสบชนิดเอและ VP7 ของโรตาไวรัส) ปฏิกิริยา monoplex RT-PCR มีความไวในการตรวจสอบสารพันธุกรรมของไวรัสตับอักเสบชนิด มากกว่าโรตาไวรัส แต่กลับพอ ๆ กันใน duplex RT-PCR วิธี DNA-ELISA สามารถใช้ในการตรวจสอบความจำเพาะ ผลผลิตที่ได้จากปฏิกิริยา RT-PCR ได้แต่ไม่สามารถเพิ่มความไวในการตรวจสอบการปนเปื้อนของไวรัสจากวิธี RT-PCRได้ สำหรับเทคนิค multiplex RT-PCR และ nested PCR สามารถตรวจพบการปนเปื้อนในหอยนางรมด้วยไวรัสโรตาและไวรัสตับอักเสบเอ เพียงชนิดเดียวหรือทั้งสองชนิดใน 26 จากจำนวนตัวอย่าง ทั้งหมด 41 ตัวอย่างโดยสายพันธุ ของไวรัสโรตาที่พบทั้งหมดเป็น Genotype G1[8] ดังนั้น เทคนิค duplex RT-PCR-DNA-ELISA สามารถใช้ในการยืนยันความจำเพาะผลผลิตจากปฏิกิริยา RT-PCR ได้แต่ duplex RT-nested PCR สามารถนำมาใช้ในการตรวจคัดกรองหอยนางรมที่ปนเปื้อนไวรัสเป้าหมายและ การตรวจสอบ genotype ของไวรัสที่ปนเปื้อนได้ ซึ่งมีประโยชน ในการศึกษาการระบาดของเชื้อด้วย