การแยกสกัดเชื้อ Pineapple mealybug wilt-associated virus -2 ค่อนข้าง บริสุทธิ์และการผลิตโพลีโคลนอลแอนติซีรัมในหนูเม้าส์พันธุ์ BALB/cMlac

มณีรัตน์ คูหาพิทักษ์ธรรม; ตันติมา กำลัง

dc.contributor.author	มณีรัตน์ คูหาพิทักษ์ธรรม
dc.contributor.author	ตันติมา กำลัง
dc.date.accessioned	2019-11-01T06:38:34Z
dc.date.available	2019-11-01T06:38:34Z
dc.date.issued	2559
dc.identifier.uri	http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/3716
dc.description.abstract	แยกสกัดเชื้อ Pineapple mealybug wilt associated virus-2 (PMWaV-2) จากส่วนที่ เป็นสีขาวของใบสับปะรดที่ติดเชื้อ PMWaV-2 ด้วยวิธี partial purification ตามวิธีการของ Gunasinghe และ German (1989) ตรวจสอบเชื้อ PMWaV-2 ใ นสารละลายด้วยวิธี Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) โ ดยใช้คู่ไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีน Heat shock protein homologous (HSP70) ของเชื้อ PMWaV-2 ซึ่งจะให้แถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 610 คู่เบส จากนั้นนำสารละลายไวรัสมาเตรียมเป็นแอนติเจนโดยผสมกับ Freund’s complete adjuvant อัตราส่วน 1:1 (ปริมาตรต่อปริมาตร) และฉีดเข้าหน้าท้อง (Intraperitoneal injection, IP) หนูเม้าส์สายพันธุ์ BALB/cMlac จำนวน 2 ตัว ใ นครั้งแรก หลังจากนั้น 1 สัปดาห์ ฉีดเชื้อ PMWaV-2 ผสมกับ Freund’s incomplete adjuvant อีก 3 ครั้ง แต่ละครั้งห่างกัน 1 สัปดาห์ เก็บ เลือดจากหางหนูในสัปดาห์ที่ 5 หลังการฉีดครั้งแรก ตรวจหาค่าไตเตอร์ของโพลีโคลนอลแอนติซีรัมที่ ผลิตได้จากหนูเม้าส์ตัวที่ 1 และ 2 โดยใช้น้ำคั้นใบสับปะรดติดเชื้อ PMWaV-2 ด้วยวิธี indirect PTAELISA พบว่ามีค่าไตเตอร์ เท่ากับ 1: 12,800 และ1:25,600 ตามลำดับ	th_TH
dc.description.sponsorship	สำนักงานคณะกรรมการการวิจัยแห่งชาติ	th_TH
dc.publisher	คณะวิทยาศาสตร์และศิลปศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา วิทยาเขตจันทบุรี	th_TH
dc.subject	หนูเม้าส์	th_TH
dc.subject	สาขาเกษตรศาสตร์และชีววิทยา	th_TH
dc.title	การแยกสกัดเชื้อ Pineapple mealybug wilt-associated virus -2 ค่อนข้าง บริสุทธิ์และการผลิตโพลีโคลนอลแอนติซีรัมในหนูเม้าส์พันธุ์ BALB/cMlac	th_TH
dc.title.alternative	Partial puriﬁcation of Pineapple mealybug wilt-associated virus -2 and production of polyclonal antiserum in BALB/cMlac mice	th_TH
dc.type	Research	th_TH
dc.author.email	maneenoi.agbiot@gmail.com	th_TH
dc.author.email	tantima@tistr.or.th	th_TH
dc.year	2559	th_TH
dc.description.abstractalternative	Partial purification procedure of Gunasinghe and German (1989) was used to extract Pineapple mealybug wilt associated virus-2 (PMWaV-2) from basal white leaf of Pattavia pineapple infection. The virus supernatant was detected by Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) using primers specific to Heat shock protein homologous (HSP70) gene of PMWaV-2 yielding fragments corresponding to the virus strain at approximately 610 bp. The PMWaV-2 antigen was prepared by mixing purified virus with Freund’s complete adjuvant at a ratio of 1:1 (v/v). Emulsion was Intraperitoneal injection into two BALB/cMlac mice for the first time, followed by 3 additional immunizations with purified virus mixed with Freund’s incomplete adjuvant at weekly intervals. Bleeding was done at week 5. Titers of the polyclonal antiserum of mouse No.1 and 2 were determined by indirect PTA-ELISA and given 12,800 and 1:25,600, respectively.	th_TH