การเปลี่ยนแปลงโคดอนเพื่อเพิ่มการแสดงออกของดีเอนเอวัคซีนต่อไวรัสตับอักเสบชนิดซีในเซลล์ที่มีต้นกำเนิดมาจากคน

อุไรวรรณ อินทมาโส; พลาธิป ชูท้วม; กนกพร ศรีสุจริตพานิช; วิทยา ภูมิภักดิ์

dc.contributor.author	อุไรวรรณ อินทมาโส
dc.contributor.author	พลาธิป ชูท้วม
dc.contributor.author	กนกพร ศรีสุจริตพานิช
dc.contributor.author	วิทยา ภูมิภักดิ์
dc.contributor.other	มหาวิทยาลัยบูรพา. คณะสหเวชศาสตร์
dc.date.accessioned	2019-06-01T14:30:22Z
dc.date.available	2019-06-01T14:30:22Z
dc.date.issued	2560
dc.identifier.uri	http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/3581
dc.description.abstract	ไวรัสตับอักเสบชนิดซีที่ก่อให้เกิดการติดเชื้ออักเสบเรื้อรังที่ตับ และพัฒนาเป็นโรคมะเร็งตับยังคงเป็น ปัญหาทางสาธารณสุข เพราะยังขาดวัคซีนและการรักษาที่มีประสิทธิภาพ จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือสร้าง recombinant plasmids ที่สามารถแสดงออกได้ในเซลล์เพาะเลี้ยงที่มีต้นกำเนิดมาจากมนุษย์ โดยเปรียบเทียบการแสดงออกของ NS3-NS4A gene จากสายพันธุ์ที่มีลำดับนิวคลิโอไทด์ที่ กำหนดเป็น wild-type codon กับ โคดอนที่ผ่านการเปลี่ยนแปลงให้แสดงออกได้ดีในเซลล์เพาะเลี้ยง ของ NS3-NS4A gene จาก genotype g3a หรือ g6f เมื่อวิเคราะห์ HepG2 ที่ถูกนำเข้าด้วย recombinant plasmids ด้วยวิธี real-time PCR พบว่า wild-type codon ของ NS3-NS4A gene จาก genotype g3a หรือ g6f สามารถแสดงออกได้ดีกว่าโคดอนที่ผ่านการเปลี่ยนแปลงประมาณ 24-27 ล้านเท่า และ 3 ล้านเท่าตามลำดับเมื่อเปรียบเทียบตัวควบคุม ภายใน HepG2 cell line ส่วนผลการวิเคราะห์ด้วย SDS-PAGE polyacrylamide gel จากปฏิกิริยา in vitro transcription ควบกับ translation ไม่สามารถตรวจสอบแถบโปรตีนเป้าหมายได้เนื่องจากมีโปรตีนที่ไม่จำเพาะอื่นเป็นจำนวนมาก ในทำนองเดียงกันวิธี western blot ที่ใช้ตรวจสอบโปรตีนเป้าหมายที่สร้างภายนอกหรือภายในเซลล์กลับพบแถบโปรตีนที่ไม่จำเพาะ อาจเนื่องมาจาก primary antibody ที่ใช้เป็นชนิด polyclonal antibody ที่วางจำหน่ายถูก กระตุ้นมาจากสายพันธุ์ที่พบระบาดทั่วไปจึงไม่จับจำเพาะต่อ genotype g3a หรือ g6f จากผลที่ได้แสดงไม่เป็นไปตามสมมุติฐานที่ว่าการเปลี่ยนแปลงโคดอนในเซลล์เพาะเลี้ยงในเซลล์เพาะเลี้ยงให้ผลการแสดงออกของยีนได้ดีกว่า wild-type อย่างไรก็ตาม recombinant DNA ที่สร้างได้จากสายพันธุ์ที่มีลำดับนิวคลิโอไทด์จาก wild type ของ genotype g3a หรือ g6f น่าจะพัฒนาเป็น DNA vaccine ที่ต่อต้านการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบซีได้	th_TH
dc.description.sponsorship	โครงการวิจัยประเภทงบประมาณเงินรายได้ (เงินอุดหนุนจากรัฐบาล) ประจำปีงบประมาณ พ.ศ. 2560 มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.language.iso	th	th_TH
dc.publisher	คณะสหเวชศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.subject	ไวรัสตับอักเสบซี	th_TH
dc.subject	ยีนต์	th_TH
dc.subject	สาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์	th_TH
dc.title	การเปลี่ยนแปลงโคดอนเพื่อเพิ่มการแสดงออกของดีเอนเอวัคซีนต่อไวรัสตับอักเสบชนิดซีในเซลล์ที่มีต้นกำเนิดมาจากคน	th_TH
dc.title.alternative	Codon optimization to enhance protein expression of a hepatitis C virus DNA vaccine in a human cell line	th_TH
dc.type	Research	th_TH
dc.year	2560	th_TH
dc.description.abstractalternative	Hepatitis C virus that causes chronic liver infection and leads to liver cancer still remains one of major public health problems because of the lack of efficient vaccines and treatments. The aim of this study is to construct recombinant plasmids the can efficiently express in human cell lines and compare the expression of nucleotides encoding wild-type to optimized codons of HCVg3a or g6f NS3-NS4A gene. According to real-time PCR analysis of HepG2 transfected with recombinant plasmids, wild-type codons of genotype g3a or g6f can substantially express mRNA than optimized codons about 24-27 and 3 millions, respectively relative to the control, in HepG2 cell line. SDS-PAGE polyacrylamide gel analysis from in vitro transcription coupled with translation reaction cannot detect the target protein due to enormous non-specific protein background. Similarly, western blot analysis for the detection of in vitro and in vivo specific protein target unexpectedly detect non-specific proteins probably due to commercial polyclonal antibody raised from common genotypes thereby not binding to genotype g3a or g6f. These results were not agreed with the hypothesis of optimized codon always more efficiently express than wildtype codon. However, the constructed recombinant DNA from wild-type codons of genotype g3a or g6f could be developed for DNA vaccines against HCV infection.	th_TH