การพัฒนาวัคซีนจากแอนติเจนในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนสำหรับโรคพยาธิใบไม้ตับ

พรอนันต์ เกื้อไข่

dc.contributor.author	พรอนันต์ เกื้อไข่
dc.contributor.other	มหาวิทยาลัยบูรพา. คณะสหเวชศาสตร์
dc.date.accessioned	2019-05-11T07:29:17Z
dc.date.available	2019-05-11T07:29:17Z
dc.date.issued	2560
dc.identifier.uri	http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/3555
dc.description.abstract	Fasciola gigantica cathepsinL, B (CatL, CatB) และ saposin-like protein 1 จัดอยู่ในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนที่มีความสำคัญ มีการแสดงออกมากในเซลล์เยื่อบุทางเดินอาหาร และปล่อยสู่สารที่พยาธิหลั่งออกมา (ES product) ชนิดของ CatL, CatB และ SAP-1 เป็นโปรตีนที่มีการแสดงออกในตัวอ่อนระยะแรก ๆ ของพยาธิสำหรับการเคลื่อนที่และย่อยอาหาร ดังนั้น โปรตีน CatL, CatB และ SAP-1 น่าจะเป็นเป้าหมายสำหรับการผลิตวัคซีนป้องกันการติดเชื้อพยาธิใบไม้ตับ F. gigantica ในการศึกษาครั้งนี้ มีการผลิต Recombinant pro-F.gigantica CatL1 (rpFgCatL1), recombinant mature F. gigantica CatL1 (rmFgCatL1), rmFgCatL1H, rmFgCatL1G, rFgCatB2 , rFgSAP-1 ในแบคทีเรียสายพันธ์ Escherichia coli BL21 ซึ่งมีมวลโมเลกุล เท่ากับ 30, 25, 25, 25, 28, 56, 12 กิโลดาลตัน ตามลำดับ ในการทดสอบวัคซีนของโปรตีน rFgSAP-1 ใช้หนูสายพันธ์ Imprinting Control Region (ICR) กลุ่มละ 10 ตัว โดยมีการฉีดโปรตีนครั้งละ 50 ไมโครลิตร เข้าใต้ผิวหนัง หลังจากการฉีดกระตุ้นครั้งสุดท้าย 2 สัปดาห์ ได้ทำให้หนูติดเชื้อโดยป้อนตัวอ่อนพยาธิระยะติดต่อ (metacercariae) ตัวละ 15 metacercariae ซึ่งผลการทดสอบวัคซีนมีการแสดงระดับการป้องกันการติดเชื้อในกลุ่ม rFgSAP-1 เท่ากับ ร้อยละ 73.2 และ 74.3 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม non vaccinated-infected และ adjuvant-infected controls ตามลำดับ แอนติบอดีในกลุ่มที่ฉีดกระตุ้นด้วยโปรนมีการทำปฏิกิริยากับ newly excysted juveniles (NEJ), 4-week-old juveniles and the ES products of 4 week-old juveniles และพบว่าในกลุ่มที่ฉีดกระตุ้นด้วยโปรตีนมีการตอบสนองทั้ง Th1 และ Th2 ซึ่งสอดคล้องกับระดับแอนติบอดี IgG1 และ IgG2a ที่เพิ่มขึ้น ระดับของเอนไซม์ตับ Serum Glutamic Oxaloacetic Transferase (SGOT) และ Serum Glutamic Pyruvate Transferase (SGPT) ในกลุ่ม rFgSAP-1 แสดงให้เห็นการลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมรอยโรคที่เกิดกับตับในกลุ่มวัคซีนลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม การศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่า โปรตีน rFgSAP-1 มีศักยภาพในการเป็นวัคซีนป้องกันพยาธิใบไม้ตับ F. gigantica และอาจจะมีการทดสอบในสัตว์เคี้ยวเอื้องและมนุษย์ต่อไป	th_TH
dc.description.sponsorship	โครงการวิจัยประเภทงบประมาณเงินรายได้จากเงินอุดหนุนรัฐบาล (งบประมาณแผ่นดิน) ประจำปีงบประมาณ พ.ศ. 2560 มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.language.iso	th	th_TH
dc.publisher	คณะสหเวชศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.subject	โรคพยาธิใบไม้ในตับ -- การป้องกันและควบคุม	th_TH
dc.subject	วัคซีนโรคพยาธิใบไม้ตับ	th_TH
dc.subject	สาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์	th_TH
dc.title	การพัฒนาวัคซีนจากแอนติเจนในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนสำหรับโรคพยาธิใบไม้ตับ	th_TH
dc.title.alternative	Development of the vaccines using protease enzymes for fasciolosis	en
dc.type	Research	th_TH
dc.author.email	earn_patho@hotmail.com	th_TH
dc.year	2560	th_TH
dc.description.abstractalternative	In Fasciola gigantica cathepsin L and B (CatL, CathB), leucine aminopeptidase (LAP), saposin-like proteins (SAP) are a family of predominant proteases that is expressed in caecal epithelial cells and secreted into the excretory-secretory products (ES). CatL, SAP, LAP and CatB isotypes are expressed in both early and late stages of the life cycle and the parasites use them for migration and digestion. Therefore, CatL, SAP, LAP and B are a plausible target for vaccination against this parasite. Recombinant proF.gigantica CatL1 (rpFgCatL1), recombinant mature F. gigantica CatL1 (rmFgCatL1), recombinant mature F.gigantica CatL1G (rmFgCatL1G), recombinant mature F.gigantica CatL1H (rmFgCatL1H), recombinant F. gigantica SAP-1 (rFgSAP-1), recombinant F. gigantica SAP-2 (rFgSAP-2), recombinant F. gigantica LAP (rFgLAP), and recombinant mature F. gigantica CatB2 (rmFgCatB2) were expressed in Escherichia coli BL21 at molecular weight 30, 25, 25, 25, 12, 12, 56, 28 kDa, respectively. By immunoblotting and immunohistochemistry, rabbit IgG anti-rFgSAP-1 reacted with rFgSAP-1 at a molecular weight 12 kDa, but not with rFgSAP-2. The rFgSAP-1 reacted with antisera from mouse infected with F. gigantica metacercariae collected at 2, 4, and 6 weeks after infection. The FgSAP-1 protein was expressed at a high level in the caecal epithelium of metacercariae and NEJ. The vaccination was performed in Imprinting Control Region (ICR) mice (n=10) by subcutaneous injection with 50 µg of rFgSAP-1 combined with Alum adjuvant. Two weeks after the second boost, mice were infected with 15 metacercariae by the oral route. The level of protection of rFgSAP-1 vaccines was estimated to be 73.2% and 74.3% when compared with non vaccinated-infected and adjuvant-infected controls, respectively. By determining the levels of IgG1 and IgG2a in the immune sera, which are indicative of Th2 and Th1 immune response, respectively, it was found that both Th1 and Th2 responses were significantly increased in rmFgCatL1G-immunized groups compared with the control groups, with higher levels of Th2 (IgG1) than Th1 (IgG2a). The levels of Serum Glutamic Oxaloacetic Transferase (SGOT) and Serum Glutamic Pyruvate Transferase (SGPT) in rFgSAP-1-immunized group showed significant decrease when compared to control groups. The pathological lesions of liver in vaccinated groups were significantly decreased when compared with control groups. This study indicates that rFgSAP-1 has a potential as a vaccine candidate against F. gigantica in mice, and this potential will be tested in ruminants	en