การพัฒนาวัคซีนจากแอนติเจนในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนสาหรับโรคพยาธิใบไม้ตับ

พรอนันต์ เกื้อไข่

dc.contributor.author	พรอนันต์ เกื้อไข่
dc.contributor.other	มหาวิทยาลัยบูรพา. คณะสหเวชศาสตร์
dc.date.accessioned	2019-03-25T09:10:00Z
dc.date.available	2019-03-25T09:10:00Z
dc.date.issued	2559
dc.identifier.uri	http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/1958
dc.description.abstract	Fasciola gigantica cathepsinL, B (CatL, CatB) จัดอยู่ในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนที่มีความสำคัญ มีการแสดงออกมากในเซลล์เยื่อบุทางเดินอาหาร และปล่อยสู่สารที่พยาธิหลั่งออกมา (ES product) ชนิดของ CatL และ B ที่แตกต่างกันจะมีการแสดงออกทั้งในตัวอ่อนระยะแรก ๆ และตัวเต็มวัยของพยาธิสาหรับการเคลื่อนที่และย่อยอาหาร ดังนั้น โปรตีน CatL และ B น่าจะเป็นเป้าหมายสาหรับการผลิตวัคซีนป้องกันการติดเชื้อพยาธิใบไม้ตับ F. gigantica ในการศึกษาครั้งนี้ มีการผลิต Recombinant pro-F.gigantica CatL1 (rpFgCatL1), recombinant mature F. gigantica CatL1 (rmFgCatL1), CatL1H, CatL1G, CatB2 ในแบคทีเรียสายพันธ์ Escherichia coli BL21 ซึ่งมีมวลโมเลกุล เท่ากับ 30, 25, 25, 25, 28 กิโลดาลตัน ตามลาดับ ในการทดสอบวัคซีนของโปรตีน rmFgCatL1G ใช้หนูสายพันธ์ Imprinting Control Region (ICR) กลุ่มละ 10 ตัว โดยมีการฉีดโปรตีนครั้งละ 50 ไมโครลิตร เข้าใต้ผิวหนัง หลังจากการฉีดกระตุ้นครั้งสุดท้าย 2 สัปดาห์ ได้ทาให้หนูติดเชื้อโดยป้อนตัวอ่อนพยาธิระยะติดต่อ (metacercariae) ตัวละ 15 metacercariae ซึ่งผลการทดสอบวัคซีนมีการแสดงระดับการป้องกันการติดเชื้อในกลุ่ม rmFgCatL1G เท่ากับ ร้อยละ 56.5 และ 58.3 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม non vaccinated-infected และ adjuvant-infected controls ตามลำดับ แอนติบอดีในกลุ่มที่ฉีดกระตุ้นด้วยโปรตีนมีการทำปฏิกิริยากับ newly excysted juveniles (NEJ), 4-week-old juveniles and the ES products of 4 week-old juveniles หลังจากทดสอบโดยวิธี dot blotting และพบว่าในกลุ่มที่ฉีดกระตุ้นด้วยโปรตีนมีการตอบสนองทั้ง Th1 และ Th2 ซึ่งสอดคล้องกับระดับแอนติบอดี IgG1 และ IgG2a ที่เพิ่มขึ้น ระดับของเอนไซม์ตับ Serum Glutamic Oxaloacetic Transferase (SGOT) และ Serum Glutamic Pyruvate Transferase (SGPT) ในกลุ่ม rmFgCatL1G แสดงให้เห็นการลดลงแต่ไม่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม รอยโรคที่เกิดกับตับในกลุ่มวัคซีนลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม การศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่า โปรตีน rmFgCatL1G มีศักยภาพในการเป็นวัคซีนป้องกันพยาธิใบไม้ตับ F. gigantica และอาจจะมีการทดสอบในสัตว์เคี้ยวเอื้องและมนุษย์ต่อไป	th_TH
dc.description.sponsorship	โครงการวิจัยประเภทงบประมาณเงินรายได้ จากเงินอุดหนุนรัฐบาล (งบประมาณแผ่นดิน) ประจาปีงบประมาณ พ.ศ. 2559	en
dc.language.iso	th	th_TH
dc.publisher	คณะสหเวชศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.subject	วัคซีน	th_TH
dc.subject	สาขาวิทยาศาสตร์การแพทย์	th_TH
dc.subject	แอนติเจน	th_TH
dc.subject	โรคพยาธิใบไม้ตับ	th_TH
dc.title	การพัฒนาวัคซีนจากแอนติเจนในกลุ่มเอนไซม์ย่อยสลายโปรตีนสาหรับโรคพยาธิใบไม้ตับ	th_TH
dc.title.alternative	Developments of the vaccines using protease enzymes for fasciolosis	en
dc.type	Research
dc.year	2559
dc.description.abstractalternative	In Fasciola gigantica cathepsin L and B (CatL, CathB) are a family of predominant proteases that is expressed in caecal epithelial cells and secreted into the excretory-secretory products (ES). CatL and CatB isotypes are expressed in both early and late stages of the life cycle and the parasites use them for migration and digestion. Therefore, CatL and B are a plausible target for vaccination against this parasite. Recombinant pro-F.gigantica CatL1 (rpFgCatL1), recombinant mature F. gigantica CatL1 (rmFgCatL1), recombinant mature F.gigantica CatL1G (rmFgCatL1G), recombinant mature F.gigantica CatL1H (rmFgCatL1H) and recombinant mature F. gigantica CatB2 (rmFgCatB2) were expressed in Escherichia coli BL21 at molecular weight 30, 25, 25, 25, 28 kDa, respectively. The vaccination was performed in Imprinting Control Region (ICR) mice (n=10) by subcutaneous injection with 50 μg of rmFgCatL1G combined with Freund’s adjuvant. Two weeks after the second boost, mice were infected with 15 metacercariae by the oral route. The level of protection of rmFgCatL1 vaccines was estimated to be 56.5% and 58.3% when compared with non vaccinated-infected and adjuvant-infected controls, respectively. Antibodies in the immune sera of vaccinated mice were shown by dot-blotting to react with the native FgCatL1G in the extract of newly excysted juveniles (NEJ), 4-week-old juveniles and the ES products of 4 week-old juveniles. By determining the levels of IgG1 and IgG2a in the immune sera, which are indicative of Th2 and Th1 immune response, respectively, it was found that both Th1 and Th2 responses were significantly increased in rmFgCatL1G-immunized groups compared with the control groups, with higher levels of Th2 (IgG1) than Th1 (IgG2a). The levels of Serum Glutamic Oxaloacetic Transferase (SGOT) and Serum Glutamic Pyruvate Transferase (SGPT) in rmFgCatL1G-immunized group showed a no significant decrease when compared to control groups. The pathological lesions of liver in vaccinated groups were significantly decreased when compared with control groups. This study indicates that rmFgCatL1G has a potential as a vaccine candidate against F. gigantica in mice, and this potential will be tested in ruminants.	en